ПРИМЕНЕНИЯ ПЬЕЗОКВАРЦЕВЫХ ИММУНОСЕНСОРОВ
ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ ПЬЕЗОКВАРЦЕВЫХ ИММУНОСЕНСОРОВ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ / Калмыкова Е.Н., Дергунова Е.С., Шашканова О.Ю., Гарбузова А.В., Ермолаева Т.Н. / Липецкий государственный технический университет, 398600, г. Липецк, ул. Московская, 30 kalmyken@stu.lipetsk.ru.
В настоящее время для лабораторной диагностики инфекционных и соматических заболеваний применяют микробиологические, иммунохимические и молекулярно-генетические методы. Для сокращения времени анализа биологических жидкостей предложено использование пьезокварцевых иммуносенсоров, регистрирующих биохимические взаимодействия практически в режиме реального времени. Разработаны пьезокварцевые иммуносенсоры для проточно-инжекционного определения бактериофагов и бактерий Yersinia enterocolitica – возбудителей инфекционного заболевания иерсиниоза, а также антител к микроорганизмам Y. entero-colitica и ДНК, появляющихся в сыворотке крови при инфекционных и аутоиммунных патологиях. Методом пьезокварцевого микровзвешивания изучены способы формирования био-рецепторного слоя иммуносенсора (физическая сорбция, ковалентная пришивка к предварительно нанесенным на поверхность электродов подложкам) с учетом параметров, необходимых для обеспечения высокой чувствительности и стабильности определений (минимальная масса пленки, сохранение активности иммобилизованных иммунореагентов и устойчивость покрытия в процессе выполнения анализа). Показана взаимосвязь линейного диапазона определяемых содержаний аналита и предела обнаружения от способа получения биослоя. Установлено, что путем модифицирования электрода сенсора гидрофобной или гидрофильной подложками можно целенаправленно менять ориентацию антигенных детерминант дифильных биорецепторных макромолекул липополисахаридов (ЛПС) в зависимости от целей проводимого анализа (определение антител или противотоксичных синтетических пептидов). Исследованы и оптимизированы условия проточно-инжекционного анализа водных растворов и биологических жидкостей с использованием иммуносенсоров (ионная сила, рН, скорость буферного раствора-носителя и температура), обеспечивающие максимальный аналитический сигнал. Изучены перекрестные иммунохимические реакции иммобилизованных антител и антигенов (молекул ДНК и ЛПС) с неспецифическими белками (BSA, OVA), гомо- и гетерологичными антителами. Предложена количественная оценка специфичности антител Y. enterocolitica к иммобилизованным ЛПС различных сероваров по значениям коэффициентов кросс-реактивности. Установлены пределы обнаружения антител к бактериям и анти-ДНК (1,3 мкг/мл и 0,4 ME, соответственно); бактерий – 0,02•10^(4) клеток/мл и фагов – 0,05•10^(5) частиц/мл. Высокочувствительные и селективные пьезокварцевые иммуносенсоры перспективны не только для оперативной диагностики инфекции, но могут быть использованы при выявлении, лечении и профилактике хронических форм иерсиниоза и аутоиммунных заболеваний. [18 Менд.съезд, 2007, т.4. с.151] | C07B, c30ve, c91ps, c08s
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ №06-03-32226.
